tissuelyser组织研磨机对提取小鼠尾巴rna的实验步骤-凯发app苹果版

实验步骤

1、首先将上海净信的组织研磨机上的制冷模块预先置于适当的温度下，使用时取出安装好。将研磨珠去rna酶处理。

2、随机抽取小鼠的尾巴，把样本剪成尽可能小段，置于无rna酶的离心管中（选择耐液氮冷冻管子），同时加入几颗研磨珠。

3、放置于液氮中一起浸泡几分钟，取出放置于预冷模块中，在全自动样品研磨仪上选择合适的研磨时间和研磨频率。（该步骤可以根据研磨的细微程度要求可以再重复一遍）

4、把研磨好的样本加入的pbs和rnaiso plus（此处选择pbs，可以根据实验需要加入其他提取液，如trizol等），继续置于研磨机上选择合适的研磨时间和研磨频率。样本将处于糊状。（其他提取试剂有可能会出现泡沫，不影响实验）

5、取出研磨管，放入冷冻离心机中，选择适当的温度进行离心几分钟。

6、小心吸取上清液至新的离心管中，盖上管盖，在室温上孵育十几分种，使样品充分裂解至匀浆液较透明，如果仍有少量颗粒属于正常情况，不影响rna提取质量和得率。

7、在离心管中加入氯仿，盖紧管盖，振荡混匀并将其在冰上孵育几分种，选择适当的温度进行离心几分钟。离心后混合物分层：上清层，中间层，下层；rna存在于上清层中。

8、将上清层小心转移到一干净的离心管中，加入等体积冰浴的异丙醇，颠倒振荡混匀，将混合的样品在适当的温度条件下，孵育几分种，选择适当的温度进行离心几分钟。rna沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底。

小心弃去上清，用冰浴的乙醇洗涤rna沉淀一次，颠倒洗涤离心管管壁，并旋涡振荡样品，尽可能让沉悬浮，选择适当的温度进行离心几分钟，再次去除上清，晾干沉淀。

10、操作的最后，在阴凉处适度干燥rna沉淀（避免过分干燥，那样会降底它的可溶性）。

11、用适量的无rna酶水或te溶液来溶解rna。抽提好的rna，保存于适当的温度下。